Picogreen雙鏈 DNA（dsDNA）定量試劑
Picogreen dsDNA
Quantitation Reagent
Ver750452-1.0
● 產(chǎn)品規(guī)格：
|
貨號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
|
GR005-01
|
Picogreen雙鏈 DNA（dsDNA）定量試劑
|
0.1
ml
|
|
GR005-02
|
Picogreen雙鏈 DNA（dsDNA）定量試劑
|
5×0.1
ml
|
● 簡(jiǎn)介：
Picogreen 是一種極為靈敏的熒光核酸染料，其僅在與DNA 雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與 DNA 濃度呈正比，因而可用于精確測(cè)量多個(gè)來(lái)源的 dsDNA，包括基因組 DNA、病毒 DNA、PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物、測(cè)序文庫(kù)等。本產(chǎn)品定量具有以下優(yōu)勢(shì)：1. 靈敏度高：可檢測(cè)低至200 pg的dsDNA，節(jié)省寶貴樣品；2. 特異性強(qiáng)：在等摩爾的RNA存在的條件下，對(duì)dsDNA具有特異性；3. 耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無(wú)需從反應(yīng)混合物中純化DNA。4. 易于使用-只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和熒光計(jì)兼容。5. 適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測(cè)和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。
● 貯存、效期及運(yùn)輸：
-20℃避光保存；有效期2年；濕冰運(yùn)輸。
● 使用方法：
注：本方法參照
2010《中國(guó)藥典》進(jìn)行操作。
1．染料工作液的配置：
PicoGreen
dsDNA 定量試劑取出后平衡至常溫，該試劑是以
0.1 ml 200×的濃縮液形式保存于DMSO中的。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量用 1×TE（10
mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按 1:200 的比例稀釋 PicoGreen 濃縮液。注意事項(xiàng)：
1.1 由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
1.2 PicoGreen試劑見(jiàn)光易分解，所以應(yīng)將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。
1.3 溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。
2．標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：
取λ
DNA 標(biāo)準(zhǔn)品（貨號(hào)：RTL6101），用無(wú)菌
TE buffer 配制成100 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品工作液。
注：標(biāo)準(zhǔn)品也可用其他已知濃度的純化 DNA；有一些產(chǎn)品描述可使用小牛胸腺 DNA 作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照我們實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)，并不推薦它作為標(biāo)準(zhǔn)品。
3．標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋：
3.1 母液稀釋：使用 TE 緩沖液將 100 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為
2 μg/ml。
3.2 梯度稀釋：參照下表，對(duì)DNA 標(biāo)品母液進(jìn)行梯度稀釋。
|
TE 體積（μl）
|
2
μg/ml DNA 標(biāo)準(zhǔn)品母液（μl）
|
Picogreen 染料工作液（μl）
|
DNA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度
|
|
0
|
1000
|
1000
|
1000
ng/ml
|
|
900
|
100
|
1000
|
100
ng/ml
|
|
990
|
10
|
1000
|
10
ng/ml
|
|
999
|
1
|
1000
|
1
ng/ml
|
|
1000
|
0
|
1000
|
Blank
|
3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：
向經(jīng)稀釋的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入1000
μl 染料工作液混勻，避光常溫孵育5
min。使用酶標(biāo)儀或熒光計(jì)檢測(cè)熒光強(qiáng)度（Ex=480
nm，Em=520
nm）；將溶液加入比色皿或取200
μl加入微孔板，確信不要在樣品中引入氣泡；以
1×TE 緩沖液空白對(duì)照，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品熒光值；用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度（ng/ml）對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.4 測(cè)量剩余樣品的熒光值：熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù)，數(shù)據(jù)可以用來(lái)產(chǎn)生
DNA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。