單鏈DNA Marker 15-120nt 預(yù)混型
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貨號(hào)
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名稱(chēng)
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規(guī)格
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RTM506
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單鏈DNA Marker（15-120 nt）
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10次
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● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱(chēng)
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規(guī)格
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貯存
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RTM506-01
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單鏈DNA Marker（15-120 nt）
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50 μl
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上樣緩沖液
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1 ml
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-20℃
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
單鏈DNA Marker由6條不同長(zhǎng)度的單鏈DNA分子混合而成，6條帶的大小為15，40，60，80，100，120 nt，80 nt 濃度為0.4 μg/μl，其余條帶濃度為0.2
μg/μl。該Marker適用于跑尿素變性膠，電泳后使用單鏈DNA
PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5102），核酸快速高靈敏度染色試劑盒（Cat：RTS5101）或RealSafe類(lèi)核酸染料染色均可以得到清晰的條帶分離效果。
樣品保存在1×TBE尿素上樣緩沖液中，上樣方便。以每次上樣5 μl計(jì)算，該單鏈DNA
Marker可以使用大約10次。
● 保存條件和運(yùn)輸：
-20℃貯存，有效期24個(gè)月；濕冰運(yùn)輸。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規(guī)格凝膠請(qǐng)適當(dāng)調(diào)整。
一. 凝膠制備：
1.1 可以選擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按照以下程序制膠：
表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)
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單鏈DNA長(zhǎng)度
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最佳凝膠濃度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）
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5×TBE
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補(bǔ)水到總體積
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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最后加入10%APS和TEMD后，立即混勻。
1.2在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠表面保持平整。
1.3靜置10-20分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說(shuō)明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
1.4去除覆蓋在分離膠上的水層；按照表二將不同體積成分在一個(gè)小燒杯中混合；最后加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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凝膠濃度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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5×TBE
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滅菌水
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.4 ml
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補(bǔ)水至體積2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端；將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
1.6靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
二. 樣品制備：
2.1
取適量體積單鏈DNA
Marker樣品，70℃處理5分鐘，冰浴制冷后待上樣；待測(cè)樣品序與2×TBE尿素上樣緩沖液等體積混合后70℃處理5分鐘，冰浴制冷后待上樣。
三.電泳：
3.1. 預(yù)電泳（可選）：電泳槽內(nèi)外加入適量1×TBE緩沖液穩(wěn)壓200 V預(yù)電泳30分鐘。電泳結(jié)束后，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的尿素。
3.2.上樣：根據(jù)梳齒確定Marker上樣量， 一般是10齒1mm厚梳子上樣5
μl，15齒1mm厚梳子上樣3
μl。
3.3. 連接電源線，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，按照以下條件電泳。
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恒電壓
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起始電流
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結(jié)束電流
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電泳時(shí)間
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適用條件
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推薦電壓
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200V
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15-20 mA/板膠
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10-15 mA/板膠
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60+ min
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最佳電壓，最優(yōu)的分辨率
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3.4. 等待上樣緩沖液的溴酚藍(lán)指示前沿到凝膠底部時(shí)終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
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變性膠濃度
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溴酚藍(lán)
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二甲苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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8 nt
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42 nt
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四．染色：
用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5102）或核酸快速銀染試劑盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到清晰的條帶分離效果。
注：如果使用核酸染料染色，RealSafe
Red（貨號(hào)：GR002）或RealSafe
All（貨號(hào)：GR004）核酸染料結(jié)合單鏈核酸效果最佳，強(qiáng)烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
● 電泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（貨號(hào)：GR002）染色：
2. 使用核酸快速高靈敏度染色試劑盒（貨號(hào)：RTS5101）染色：
