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技術規(guī)格
主條帶數量	8條
貯存緩沖液	50 mM Tris-HCl pH7.5，15%甘油，穩(wěn)定劑，溴酚藍
濃度	0.2-0.4 μg/μl
上樣前處理	溶化混勻后直接上樣，不要加熱處理
推薦凝膠體系	8%或4-15%Tris-甘氨酸非變性凝膠
推薦上樣體積	5 μl（1mm厚度10齒梳子）
推薦染色方法	非預染Marker，電泳時不可見條帶，電泳后需要考馬斯亮藍染色可以觀察條帶
不適用于變性電泳	為非變性Marker，不適用于變性電泳

● 產品簡介：

本產品有6種蛋白組成，分子量范圍為21-1000 kD，經過非變性電泳后，用考馬斯亮藍染色后可以得到8條主帶。

蛋白名稱	分子量(kD)	蛋白來源	pI	說明
PR1	~1000	equine	N/A	非變性下約1000 kD
Ferritin	~440 ~880	equine spleen	N/A	非變性下440 kD，880 kD
RC2	~200	重組蛋白	6.7	單體蛋白分子量為75 kD，在Tris-甘氨酸非變性下表現為分子量~200 kD
RC1	~66 ~132	重組蛋白	4.7	單體蛋白分子量為~66 kD，在Tris-甘氨酸非變性下表現為單體（分子量~66 kD）和二聚體（分子量~132 kD）
Ovalbumin	~45	egg white	5.2	球蛋白，分子量為45 kD，非變性條件下大于45 kD會出現電荷異構體（charge isomer，分子量~50 kD）
Trypsin Inhibitor	~21	Soybean	4.5	非變性下分子量~21 kD

● 使用說明：

1. 取出產品后，常溫溶化后，徹底混勻，上樣電泳。

注：上樣量根據膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請適當調整上樣量。

2. 該產品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：

RTD6130或RTD6135）。如自備試劑，經典Laemmli系統中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進行非變性電泳。

3. 電泳條件：

建議使用8%，10%非變性膠或者4-15%梯度非變性膠（貨號：RTD6117-0415）進行電泳。

恒電壓	120 V
起始電流	27-35 mA/板膠
結束電流	7-10 mA/板膠
電泳時間	50-60 min

4. 電泳結束后，考馬斯亮藍染色，觀察結果。

注：使用銀染染色時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法，需要適當降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。

● 注意事項：

1. 該產品僅適用于酸性蛋白非變性電泳，不適用于變性電泳和堿性蛋白非變性電泳。非變性蛋白電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小，更多是作為相對參照。因為在非變性條件下，蛋白的電荷，空間結構，物化性質等都對蛋白的遷移有影響，所以非變性電泳的蛋白分子量需謹慎解讀并結合其他方法（如SEC-HPLC）驗證。

2. 非變性蛋白電泳Marker由于要保持蛋白的天然結構，都沒有偶聯染料，在電泳時基本都看不到條帶；但是RTD6104中的440 kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見淡黃色，凝膠轉膜后，膜上也可以看到黃色的440 kDa條帶，可以大體判斷Marker轉膜的效果。

3. 非變性蛋白Marker轉膜后可以用麗春紅染色液（貨號：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測轉膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。

4. 推薦使用8%（貨號：RTD6130），4-15%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（貨號：RTD6135）或者3-12%和4-16% RealPAGE Native BN/CN預制膠（貨號：RTD6139）。其他濃度并非不適用，因為非變性蛋白Marker遷移率不僅受分子量影響，還受其他因素影響，所以在不同濃度的凝膠中，分子量標記的遷移位置會變化，主帶的電荷異構體的表觀分子量也會變化。如，132和200 kD條帶在10% Tris-甘氨酸非變性膠中幾乎重疊，不能有效分離（實驗示例3），而在4-15%Tris-甘氨酸非變性中可以有效分離（實驗示例1）。

實驗示例：

1 4-15%Tris-甘氨酸非變性

2 4-16% Blue Native gel

3. 10%Tris-甘氨酸非變性膠

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