10×RealBlot 快速濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液
10×RealBlot Rapid Tank
Transfer buffer Ver.740865
● 產(chǎn)品組成：
|
貨號(hào)
|
名稱
|
規(guī)格
|
|
RT5020
|
10×RealBlo快速濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液
|
500 ml
|
|
|
說(shuō)明書
|
一份
|
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
10×RealBlo快速濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液使用獨(dú)特配方，能高效快速地將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜（PVDF或硝纖膜）上。使用濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）能在15-40分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)膜過(guò)程。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
快速和環(huán)保：快速轉(zhuǎn)膜液不使用甲醇，減輕了對(duì)實(shí)驗(yàn)者和環(huán)境的傷害。
兼容性好：快速轉(zhuǎn)膜液能兼容Laemmli膠（Tris-甘氨酸膠），Bis-Tris膠等多種凝膠。
轉(zhuǎn)移效率高：快速轉(zhuǎn)膜液對(duì)分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉(zhuǎn)移效率，有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時(shí)轉(zhuǎn)移的問題。
● 貯存、效期及運(yùn)輸：
4-8℃貯存；有效期一年；常溫運(yùn)輸。
● 使用說(shuō)明：
轉(zhuǎn)膜前的準(zhǔn)備：
裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的轉(zhuǎn)印膜；足夠的1×快速轉(zhuǎn)膜液；無(wú)水甲醇（處理PVDF膜用）
一 濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）：
1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液
|
加入順序
|
原料
|
1×快速轉(zhuǎn)膜液配制量 1000 ml
|
|
1
|
10×快速轉(zhuǎn)膜液
|
100 ml
|
|
2
|
超純水
|
700 ml
|
|
3
|
無(wú)水乙醇
|
200 ml
|
2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。
3 PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤(rùn)濕30秒，隨后浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘；NC膜無(wú)需處理，直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。
4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。
注意：水中漂洗時(shí)間不能超過(guò)2分鐘，否則可能會(huì)影響大分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。
5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)：
1 負(fù)極（陰極）
2 一塊海綿
3 濾紙（3張，每張厚度0.8mm）
4 凝膠
5 轉(zhuǎn)印膜
6濾紙（3張，每張厚度0.8mm）
7 一塊海綿（根據(jù)三明治的厚度選擇是否使用）
8 正極（陽(yáng)極）
注意： = 1 \* GB3 ① 要徹底清除三明治結(jié)構(gòu)中的氣泡，適當(dāng)補(bǔ)加1×快速轉(zhuǎn)膜液保持三明治結(jié)構(gòu)濕潤(rùn)。
= 2 \* GB3 ② 三明治結(jié)構(gòu)的制作不能太緊，也不能太松。太緊和太松都會(huì)影響轉(zhuǎn)印效果。如果太緊的話，可以去除陽(yáng)極一側(cè)的海綿。
6 將三明治結(jié)構(gòu)放于轉(zhuǎn)移槽中，轉(zhuǎn)印槽中灌滿1×快速轉(zhuǎn)膜液。
7 濕轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移：
|
凝膠厚度
|
恒流
|
分子量大小
|
轉(zhuǎn)膜時(shí)間
|
電壓變化
|
|
1.0 mm
|
300 mA
|
20 kD以下
|
20 min
|
50-65 V
|
|
20- 150 kD
|
40 min
|
|
150 kD 以上
|
60 min以上
|
|
400 mA
|
20 kD以下
|
15 min
|
|
20- 150 kD
|
30 min
|
|
150 kD 以上
|
40 min以上
|
|
|
|
|
注：如果凝膠厚度1.5 mm，延長(zhǎng)轉(zhuǎn)膜時(shí)間15 min
|
|
8 配好的1×快速轉(zhuǎn)膜液不建議重復(fù)使用，以免影響轉(zhuǎn)膜效果。
二 問題解決：
|
問題
|
可能原因
|
解決方法
|
|
轉(zhuǎn)膜不充分
|
濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移槽鉑金絲有鹽沉積
|
徹底用超純水清洗轉(zhuǎn)移槽
|
|
轉(zhuǎn)移膜，濾紙，凝膠沒有在1×轉(zhuǎn)移緩沖液中徹底平衡
|
轉(zhuǎn)移膜，濾紙，凝膠要在1×快速轉(zhuǎn)膜液中平衡5分鐘，震蕩平衡更好
|
|
PVDF膜沒有用甲醇預(yù)處理
|
PVDF膜要用甲醇徹底潤(rùn)濕，然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘
|
|
轉(zhuǎn)膜時(shí)間不充分
|
適當(dāng)延長(zhǎng)轉(zhuǎn)膜時(shí)間
|
|
不連續(xù)的轉(zhuǎn)膜
|
凝膠和膜之間有氣泡
|
轉(zhuǎn)膜三明治做好后，用滾軸把凝膠和膜之間的氣泡趕走
|
|
PVDF膜沒有用甲醇預(yù)處理
|
PVDF膜要用甲醇潤(rùn)濕，然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘
|
|
轉(zhuǎn)膜設(shè)備不工作
|
電泳電源不配套
|
電泳電源要符合以下參數(shù)：300W，5-300V，0.01-3A
|
實(shí)驗(yàn)示例：
