植物脯氨酸檢測試劑盒
Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin Ver.751259-2.0
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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PP5040
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植物脯氨酸檢測試劑盒
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50次
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● 產(chǎn)品組成：
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組分貨號
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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PP5040-01
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試劑1-Pro裂解液
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125
ml
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RT
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PP5040-02
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試劑2-Pro標(biāo)準(zhǔn)液
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1
ml
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4℃
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PP5040-03
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試劑3-Pro顯色液
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50
ml
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4℃，避光
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● 產(chǎn)品簡介：
脯氨酸(Proline，Pro)是一種環(huán)狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電點為6.30，易溶于水。在正常環(huán)境情況下脯氨酸含量較低，但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，脯氨酸常有明顯積累，即積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發(fā)生反應(yīng)，能產(chǎn)生穩(wěn)定的紅色產(chǎn)物，以分光光度計測定520 nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。該試劑盒不使用甲苯等有害溶劑，經(jīng)濟環(huán)保。
該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量，不適用于動物及醫(yī)療樣品中脯氨酸的測定。按照一次使用1 ml Pro顯色液計算，試劑盒可以使用50次。
● 自備材料：
植物根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板；1ml玻璃比色皿（光程1 cm）；分光光度計；水浴鍋或干浴器；離心機
● 操作步驟：
1. 樣本處理：
取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20 mg重量加入1 ml Pro裂解液（注意是否已經(jīng)加入無水乙醇）的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5 ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻)，10000 rpm離心 2分鐘，上清即為脯氨酸提取液，4℃保存?zhèn)溆谩４郎y提取液如不能及時測定，應(yīng)置于-20℃保存，1-2天內(nèi)穩(wěn)定。
2. 配制系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：
取1 ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到試劑2-Pro標(biāo)準(zhǔn)液的小管中，混勻后徹底溶解，即配成的Pro標(biāo)準(zhǔn)液（100 mg/ml）。
取1 μl 100 mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)液加入到1 ml Pro裂解液中，即配成100 μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液待用。參照下表配制1-8號不同濃度的Pro標(biāo)準(zhǔn)溶液。
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編號
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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100 μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液加入量（ml）
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0.01
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0.02
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0.04
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0.06
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0.08
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0.10
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0.15
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0.2
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Pro裂解液（ml）
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0.49
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0.48
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0.46
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0.44
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0.42
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0.4
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0.35
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0.3
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脯氨酸含量（μg）
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1
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2
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4
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6
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8
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10
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15
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20
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4. 樣品測定:
4.1分光光度計測定：參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液，依次加入試劑：
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編號
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0
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1-8
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9-X
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空白管
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標(biāo)準(zhǔn)管
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測定管
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試劑1-Pro裂解液
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0.5 ml
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-
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-
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步驟1中的脯氨酸提取液
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-
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-
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0.5 ml
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Pro標(biāo)準(zhǔn)液（步驟3中1-8管）
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-
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0.5 ml
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-
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試劑3-Pro顯色液
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1 ml
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1 ml
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1 ml
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4.2水浴煮沸或干浴20分鐘，間歇混勻。加熱時務(wù)必注意避免液體暴沸濺出，可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。
4.3冰浴或流水冷卻至室溫，10000 rpm離心 2分鐘，如發(fā)現(xiàn)沒有不溶物，也可以不離心。
4.4取上清，用空白管作為對照，取1 ml反應(yīng)混合液用分光光度計測定520 nm吸光度值。
5. 計算：
以系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)(1-8號管)含量(μg)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測定管的吸光度進而計算其脯氨酸含量。
如使用分光光度計測定，根據(jù)如下公式計算具體樣品中脯氨酸的含量：
植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=1.5（C×VT）/(W×VS) =3C/W
C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的脯氨酸含量(μg)
VT=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)，此處為1 ml
W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)
VS=步驟4.1中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)，本實驗為0.5 ml
1.5系數(shù)為步驟4.1中反應(yīng)混合液體積為1.5 ml，取1 ml測定吸光值